FACSAria流式细胞仪上样准备

FACSAriaⅡ流式细胞仪上样准备

（一）上样时需要准备的物品

? 漂白水3-5L ? 75%酒精5L

? 无菌PBS或生理盐水5-10L （二）FACSAriaⅡ 分选时需自备的质控品

? Accudrop beads（分选时液滴延迟校准）：货号345249，货期需4周，

如需分选要提前订购。

注：做分选时需自备，如无自备亦可上样，但不保证分选效果。 （三）上样时，样品的准备

? 保证细胞活性：需4℃冰上保存

? 保证样品为单个细胞，不黏连：反复吹打，用尼龙膜过滤 ? 分选时，需再次培养的，收集管内需装至少1/2培养基。

建立实验模板

1.在软件界面左侧Browser面板下，依次点击New Folder、Experiment、Specimen（均可重命名），单击Specimen左侧“+”符号，显示下方的Tube，点击左侧灰色指示箭头，使之变成绿色。

2. 在软件Cytometer面板上，点击Parameters选项卡，选择实验所需荧光通道（按Ctrl键可多选），并删除多余通道。选择荧光素名称、信号放大类型（log/lin）、信号脉冲类型（H/A/W），

3. 在右侧worksheet页面中，画出实验所需模板：选择点图（双参数）或直方图（单参数），在图中选择参数，并建立所需“门”（多边形、矩形、十字象限形、线形，根据实验情况而定）。利用鼠标右键Show Populations选项建立图之间的联系。

4.至此，一个简单的实验模板基本建成。现在可以将样本管放在上样台上，点击上样面板的load，此时Acquire Data自动被激活或手动点击采集控制面板上的Acqire data按钮，仪器开始获取样本数据。

5.调整Cytometer面板中各通道电压，使FSC/SSC中信号位于利于观察的位置。调整阈值（Threshold），去除碎片和噪音信号。调整上样速度（Flow Rate）。