ELISA操作步骤

Envirology ELISA试剂盒说明书

试剂盒内容物：

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Cry1Ab/Cry1Ac 抗体包被固相板 Cry1Ab/Cry1Ac 阳性对照组 Cry1Ab/Cry1Ac 酶结合物 底物

未提供的物品：

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TPBS清洗缓冲液（PBS/0.05% Tween-20 wash buffer），常温保存，最多一年，然后丢弃。 萃取缓冲液（PBS0.55% Tween-20）。可以将0.5 ml Tween-20加入到100 ml 上一步的TPBS缓冲液内制得。不使用时放在冰箱内冷藏，ELISA分析时升至室温使用。

HCL(1 Mol/L) 终止液。将83 ml盐酸溶液（37%）到917ml蒸馏水或去离子水中制的。配置过程在通风橱内操作。室温下保存可使用2年。

一次性吸管，可调节排气移液枪，记号笔，parafilm膜等。

实验步骤：

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此步在15min内完成。加50ul 到板孔内，随即在相应板孔内进行如下操作，加50ul萃取缓冲液作为空白对照，加50ul Cry1Ab阳性对照，加50ul样品萃取物到板孔内。 在桌面上晃动96孔板20~30秒，使内容物充分混匀。注意勿使内容物溅出！

盖上盖子勿使水分蒸发，并在室温下孵化1~2小时。如果有孔板摇床，可在200 rpm速度下摇动孔板。注意：根据组织萃取方法，用户应该决定一个合适的孵化时间，以使得到最佳结果。

孵化结束后，小心移去盖子并将孔内液体甩到废水池内，要剧烈甩弃，尽量甩尽孔内液体。用TPBS清洗缓冲液清洗板孔（300ul/孔），然后甩尽缓冲液，3次重复。 每孔加100ul底物。

在桌面上晃动96孔板20~30秒，使内容物充分混匀。盖上盖子室温下孵化15~30分钟。 加100ul HCL(1 M)终止液，并且混匀。此步能使孔内物质变黄。注意：在加入终止液后30分钟内读板。

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读板：

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调节读板仪波长到450nm。如果读板仪有双波长功能，可依据文献选600、630或者650nm作为备选波长。

设置读板仪空白项到空白对照孔。